Dosage des protéines par la méthode de Kjeldahl

Matériel et Réactifs

:
  • Bloc de minéralisation
  • Appareil automatique de distillation
  • H2SO4 pur concentré exempt de composés azotés
  • Lessive de soude à 30 %
  • Catalyseur (comprimés Kjeldahl) :  95,4%  K2SO4 - 2,8%  TiO2 - 1,8%  CuSO4
  • Rouge de méthyle
  • HCl 0,1 mol/L
  • NaOH 0,1 mol/L
Il est TRES IMPORTANT de respecter les consignes de sécurité pour effectuer cette manipulation (blouse, lunettes et gants) et de s’informer à chaque étape sur les consignes d’utilisation des appareils.
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Etape 1 : Minéralisation

(durée : 5 heures)
  • Peser avec précision une masse donnée de produit (quelques mg à g en fonction de la teneur attendue en protéines dans le produit) et l’introduire dans le tube à minéraliser.
  • Ajouter un comprimé de catalyseur de Kjeldahl, un comprimé d'antimousse et 10 mL d'acide sulfurique délivrés à l'aide d’un dipenseur automatique. Attention aux risques de mousses en début de chauffage.
  • Placer le tube dans le bloc de minéralisation réservé à cet effet. S'assurer que le collecteur de fumées est hermétiquement fermé (présence obligatoire de tous les tubes ou de bouchons), et que la pompe est en marche. Afficher 150°C à l'aide du bouton de température ainsi que le temps de minéralisation (5 heures). Mettre le régulateur sur ON. Après 10 minutes, et s'il n'y a pas de mousses formées dans le tube, augmenter la température jusqu'à 250°C, puis à 350 °C 10 minutes plus tard. Lorsque la minéralisation est terminée, laisser refroidir le tube puis ajouter environ 20 mL d'eau (sous la hotte).

Etape 2 : Distillation

(durée : environ 15 minutes)
  • Vérifier que les réservoirs d’eau et de soude sont suffisamment remplis et ouvrir le robinet d'arrivée d'eau.
  • Mettre l'appareil sous tension et programmer le volume de soude à dispenser (3 signaux sonores successifs).
  • Positionner le tube contenant la solution à distiller dans le porte tube et s'assurer qu'il est solidement fixé.
  • Placer sur le portoir, en dessous du réfrigérant à serpentin, un erlenmeyer contenant 25 mL d'HCl 0,1 mol/L, 6 gouttes de rouge de méthyle et 10 mL d'eau. S'assurer que le tuyau plonge dans la solution.
  • Fermer la porte, le contacteur est alors enclenché. L'appareil ne peut fonctionner que si la porte est fermée.
  • Appuyer sur le bouton STEAM. La soude est alors dispensée et la distillation commence. Laisser distiller 8 minutes (signal sonore indiquant la fin de la distillation) puis abaisser l'erlenmeyer de façon à ce que le tuyau ne plonge plus dans la solution.
  • Laisser refroidir et récupérer l’erlenmeyer.

Etape 3 : Dosage

(durée : environ 15 minutes)
  • Doser en retour par la soude 0,1 mol/L la quantité de HCl n'ayant pas réagi et en déduire le pourcentage d'azote dans l'échantillon.
  • Faire un témoin ou blanc dans les mêmes conditions.