La composition en acides gras : des informations qualitatives et quantitatives
L’établissement du profil en acides gras permet de connaître à la fois la répartition entre acides gras saturés, mono-insaturés et poly-insaturés d’une matière grasse, mais également les différentes proportions relatives de chacun d’entre eux par rapport aux acides gras totaux et la concentration de chacun acide gras dans la matière grasse.
La composition en acides gras : des informations qualitatives et quantitatives
PrincipeLes matières grasses sont essentiellement composées d’esters d’acides gras, en particulier de triglycérides. Compte tenu de leur masse moléculaire élevée, ils sont peu volatils et doivent être dérivés afin d’être analysés en chromatographie en phase gazeuse.
Une méthode de dérivation ‘’rapide’’ consiste à transestérifier en milieu alcalin, les triglycérides et à former ainsi des esters d’acides gras. Cette méthode est applicable avec des huiles végétales. Cette méthode ne produit pas d’esters à partir d’acides gras libres.
Méthode adaptée de la norme NF EN ISO 12966-2 ("esters méthyliques d’acides gras/chromatographie")
Les acides gras libres : des marqueurs de l’hydrolyse des lipides
Appareillage & Réactifs- Verrerie
- Chromatographe en phase gazeuse couplé à un détecteur à ionisation de flamme
- Ether de pétrole 35-60°, Méthanol anhydre
- Hydroxyde de sodium 2 mol/L dans le méthanol
- Acide chlorhydrique 1 mol/L dans le méthanol
- Ether de pétrole contenant un standard interne (triglycéride en C17 à 3 mg/mL).
- Mélange de triglycérides étalons dans l’éther de pétrole (env. à 3 mg/mL chacun)
Méthode adaptée de la norme NF EN ISO 12966-2 ("esters méthyliques d’acides gras/chromatographie")
La composition en acides gras : des informations qualitatives et quantitatives
Mode opératoire- Dans un petit tube en verre pouvant être bouché, peser avec précision environ 30 mg de matière (3 gouttes d’huile végétale).
- Ajouter 1 mL d'éther de pétrole contenant le standard interne (triglycéride en C17). Agiter pendant 10 secondes.
- Introduire 0,2 mL de NaOH 2 mol/L dans le méthanol. Boucher. Agiter vigoureusement pendant 10 secondes en maintenant le bouchon.
- Porter au bain-marie à 50°C durant 30 secondes tout en continuant de maintenir le bouchon fermé (risques de surpression).
- Agiter pendant 10 secondes et déboucher le tube avec précaution.
- Ajouter 0,4 mL d'HCl méthanolique 1 mol/L. Agiter et laisser décanter.
- Prélever à la seringue CPG la quantité appropriée de phase supérieure (0,3 à 0,5 μL) et injecter en CPG-FID.
- conditions chromatographiques : colonne capillaire en silice greffée DB-WAX, 30 m de long, 0,32 mm de diamètre intérieur, film de 0,50 µm ; gaz vecteur hydrogène, 1 mL/min - split 10 mL/min ; températures du four 180°C, de l'injecteur 250°C, du détecteur 250°C.
≈ 45 minutes / échantillonMéthode adaptée de la norme NF EN ISO 12966-2 ("esters méthyliques d’acides gras/chromatographie")