Les tocophérols : des composés antioxydants

 Principe

La teneur en tocophérols est déterminée par chromatographie liquide haute performance couplée à un détecteur UV-VIS à barrette de diodes et à un détecteur fluorimétrique.

L’analyse chromatographique est réalisée en régime isocratique à l’aide d’un mélange THF / n-heptane. La détection UV est effectuée à 298 nm et la détection fluorimétrique à 298 nm (exc) / 344 nm (em). 
 

 

Méthode adaptée de la norme NF EN ISO 9936 ("tocophérols et tocotriénols/chromatographie")

Les tocophérols : des composés antioxydants

 Appareillage & Réactifs

• Verrerie
• Chromatographe liquide haute performance couplé à un détecteur UV-VIS à barrette de diodes et à un détecteur fluorimétrique (HPLC/DAD/FLUO)
• Colonne HPLC : LiChrospher 100 Diol 250 x 4,6 mm, 5μm
• Phase mobile : THF/n-heptane (3,85/96,15, v/v), les solvants étant préalablement filtrés (0,45 μm)
• Débit 1 ml/min
• Détection UV : 298 nm - fluorimétrique : 298 nm (exc) / 344 nm (ém)
• Etalons : mélange d’α-, β-, γ- et δ-tocophérols et solution de α-tocophérol à 100 mg/L de n-heptane.

Méthode adaptée de la norme NF EN ISO 9936 ("tocophérols et tocotriénols/chromatographie")

Les tocophérols : des composés antioxydants

 Mode opératoire

• Peser avec précision environ 1 g de matière grasse dans une fiole jaugée de 10 mL.
• Compléter à 10 mL avec du n-heptane qualité HPLC.
• Mélanger au vortex pendant 1 minute précisément puis dans un bain à ultrasons pendant 30 secondes.
• Filtrer l’échantillon sur filtre 0,45 μm et injecter 20 μL du filtrat en HPLC.
• Afin d’identifier les différents isomères de tocophérols présents dans la matière grasse, injecter 20 μL d’un échantillon contenant les 4 isomères (α, β, γ, δ) et déterminer les temps de rétention des différents composés.
• Afin de doser les différents isomères dans la matière grasse, réaliser un étalonnage externe avec une solution mère d’α-tocophérol étalon à différentes concentrations (0 à 100 mg/L). Injecter pour cela 20 μL de l’échantillon d’α-tocophérol à chacune des concentrations. 

 ≈ 45 minutes / échantillon

Méthode adaptée de la norme NF EN ISO 9936 ("tocophérols et tocotriénols/chromatographie")