Dosage des protéines par la méthode de Kjeldahl

Matériel et Réactifs

Bloc de minéralisation
Appareil automatique de distillation
H₂SO₄ pur concentré exempt de composés azotés
Lessive de soude à 30%
Catalyseur (comprimés Kjeldahl) : 95,4% K₂SO₄ - 2,8% TiO₂ - 1,8% CuSO₄
Rouge de méthyle
HCl 0,1 mol/L
NaOH 0,1 mol/L

Il est TRES IMPORTANT de respecter les consignes de sécurité pour effectuer cette manipulation (blouse, lunettes et gants) et de s’informer à chaque étape sur les consignes d’utilisation des appareils.
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Etape 1 : Minéralisation

(durée : 5 heures)

Peser avec précision une masse donnée de produit (quelques mg à g en fonction de la teneur attendue en protéines dans le produit) et l’introduire dans le tube à minéraliser.
Ajouter un comprimé de catalyseur de Kjeldahl, un comprimé d'antimousse et 10 mL d'acide sulfurique délivrés à l'aide d’un dipenseur automatique. Attention aux risques de mousses en début de chauffage.
Placer le tube dans le bloc de minéralisation réservé à cet effet. S'assurer que le collecteur de fumées est hermétiquement fermé (présence obligatoire de tous les tubes ou de bouchons), et que la pompe est en marche. Afficher 150°C à l'aide du bouton de température ainsi que le temps de minéralisation (5 heures). Mettre le régulateur sur ON. Après 10 minutes, et s'il n'y a pas de mousses formées dans le tube, augmenter la température jusqu'à 250°C, puis à 350 °C 10 minutes plus tard. Lorsque la minéralisation est terminée, laisser refroidir le tube puis ajouter environ 20 mL d'eau (sous la hotte).

Etape 2 : Distillation

(durée : environ 15 minutes)

Vérifier que les réservoirs d’eau et de soude sont suffisamment remplis et ouvrir le robinet d'arrivée d'eau.
Mettre l'appareil sous tension et programmer le volume de soude à dispenser (3 signaux sonores successifs).
Positionner le tube contenant la solution à distiller dans le porte tube et s'assurer qu'il est solidement fixé.
Placer sur le portoir, en dessous du réfrigérant à serpentin, un erlenmeyer contenant 25 mL d'HCl 0,1 mol/L, 6 gouttes de rouge de méthyle et 10 mL d'eau. S'assurer que le tuyau plonge dans la solution.
Fermer la porte, le contacteur est alors enclenché. L'appareil ne peut fonctionner que si la porte est fermée.
Appuyer sur le bouton STEAM. La soude est alors dispensée et la distillation commence. Laisser distiller 8 minutes (signal sonore indiquant la fin de la distillation) puis abaisser l'erlenmeyer de façon à ce que le tuyau ne plonge plus dans la solution.
Laisser refroidir et récupérer l’erlenmeyer.

Etape 3 : Dosage

(durée : environ 15 minutes)

Doser en retour par la soude 0,1 mol/L la quantité de HCl n'ayant pas réagi et en déduire le pourcentage d'azote dans l'échantillon.
Faire un témoin ou blanc dans les mêmes conditions.