Quelles sont les bases de la spectroscopie d'absorption UV-visible ?
Le spectrophotomètre
Un spectrophotomètre « à simple faisceau » est composé :
- d'une source polychromatique
- d'un sélecteur de longueur d'onde et, éventuellement, le sélecteur de source
- d'un compartiment échantillon
- d'un détecteur
- d'un écran de lecture et /ou d'un ordinateur
Pour des solutions liquides, des cuves de trajet optique défini sont utilisées. Elles peuvent être en quartz, verre ou plastique par exemple, en fonction de l'échantillon.
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| épaisseur 1 mm verre |
épaisseur 10 mm verre |
épaisseur 10 mm "quartz" |
épaisseur 50 mm verre |
épaisseur 10 mm verre, petit volume |
épaisseur 10 mm verre, très petit volume |
épaisseur 10 mm plastique, rétrécie |
Sous forme de poudre, les échantillons sont placés dans un porte-échantillon dédié (on parle de sphère d'intégration).
Schéma de principe d'un spectrophotomètre
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Fonctionnement d’un spectrophotomètre
Une source polychromatique fournit de la lumière "blanche" dont un monochromateur extrait le rayonnement à la longueur d'onde demandée par l'utilisateur. L'intensité de ce rayonnement est mesurée après qu'il a traversé l'échantillon à analyser contenu dans la cuve. Cette intensité est comparée à une valeur de référence - la valeur affichée par l'appareil rend compte de cette comparaison. Ainsi, dans le cas d'un appareil « à simple faisceau », le spectre de référence contenant la solution (solvant ou tampon selon le cas) sans l'échantillon est enregistré au préalable. Pour un appareil « à double faisceau », une cuve contient l'échantillon et une autre la solution sans échantillon : l'appareil fait alors directement la différence entre les deux absorbances mesurées.
