Cas du sulfaméthoxazole

Reprenons la théorie pour construire la gamme étalon :
L’absorbance spécifique du sulfaméthoxazole est de 673 dans une solution alcaline et à une λmax de 256 nM.
Ceci implique qu’une solution de 1 gramme de sulfaméthoxazole dans 100 mL (1%) d’une solution alcaline devrait avoir une absorbance (ou DO pour densité optique) de 673. Cette valeur est impossible à mesurer avec le matériel habituel. Il faut donc envisager des dilutions pour se placer dans la fenêtre d’analyse des spectrophotomètres, c’est à dire autour d’une DO de 1. Soit une première dilution au 1/50° :

  En pesant 20 mg sur une balance de précision l’erreur est négligeable, les conditions sont optimales pour réaliser la solution mère de sulfaméthoxazole référence. Dans une fiole jaugée de 100 mL, les 20 mg de sulfaméthoxazole étalon sont additionnés, dissous dans quelques mL d’éthanol puis on complète à 100 mL avec de l’eau basique (NaOH 0,05M). Cette solution devrait théoriquement avoir une DO de 13,46 selon la relation décrite plus haut. Cette valeur étant trop haute pour une lecture directe sur le spectrophotomètre, nous allons procéder à des dilutions supplémentaires.
Les solutions filles 1, 2, 3; correspondant aux solutions diluées 1/10°, 1/20° et 1/40° vont être réalisées.