De l’HPLC à l’UHPLC

L’élément qui a permis à la chromatographie liquide de passer de la haute performance (HP) à l’ultra-haute performance (UHP) est la capacité des pompes à résister à des pressions dépassant les 415 bars. Avec l’UHPLC, les pressions peuvent dépasser 1 000 bars et les systèmes récents peuvent atteindre 1 500 bars (pression équivalente au point le plus bas de tous les océans du globe soit 11 km de profondeur).

La résistance des pompes à la pression des systèmes UHPLC a permis d’utiliser des colonnes remplies avec des particules de plus en plus fines. Les premières colonnes pour UHPLC utilisaient des particules de 2 µm (générant 600 bars de pression avec de l’eau circulant à 400 µL/min) tandis que les colonnes les plus récentes atteignent 1,5 µm (générant 1 300 bars de pression dans les mêmes conditions).

L’UHPLC a permis une réduction du temps d’analyse en chromatographie en phase liquide tout en conservant une bonne séparation des composés (voir figure : les trois composés sont séparés en 2,5 min par UHPLC au lieu de 20 min en HPLC tout en conservant la même résolution entre les pics 2 et 3).

Le tableau ci-dessous regroupe les avantages et inconvénients de l’UHPLC par rapport à l’HPLC.