L’HPLC : high performance liquid chromatography

L’HPLC (ou chromatographie en phase liquide haute performance ou haute pression) est une technique d’analyse séparative, basée sur une migration progressive des composés dans une colonne supportant les hautes pressions.

Les interactions servant à retenir et éluer les composés vont se jouer entre :
  • Le composé : C
  • La phase mobile : PM
  • La phase stationnaire : PS
Illustration des échanges entre le composé C, la phase mobile PM et la phase stationnaire PS. Des flèches doubles symbolisent les échanges entre C et PM, C et PS, PM et PS.

Il existe différents modes possibles en HPLC. Le mode de séparation choisi dépend des propriétés des molécules à séparer.

Les différents types de chromatographie communément utilisés sont :

  1. La chromatographie de partage (la plus utilisée)
  2. La chromatographie ionique
  3. La chromatographie d’exclusion stérique
  4. La chromatographie d’adsorption (peu utilisée, dédiée à des applications particulières)

Le schéma simplifié ci-dessous vous permettra d’appréhender le mode d’HPLC le mieux adapté à la séparation des composés selon leurs propriétés.

Arbre de décision du type d'HPLC en fonction de la molécule. Si M > 2000, organosoluble, alors exclusion stérique. Si M > 2000 et hydrosolube, slors exclusion stérique ou partage en phase inverse. Si M < 2000, Hydrosoluble et ionique, alors ionique. Si M < 2000, hydrosolubleet non ionique, alors partage en phase normale ou inverse. Enfin, si M < 2000, organosoluble, alors partage en phase normale ou inverse.
La qualité d’une séparation chromatographique peut être évaluée grâce à différents paramètres chromatographiques que vous retrouverez dans le tiroir « Paramètres chromatographiques »
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