Quelles sont les bases de la fluorescence ?
Appareillage d'un spectrofluorimètre stationnaire
Un spectrofluorimètre est composé d'une source lumineuse, de monochromateurs d'excitation et d'émission et d'un photomultiplicateur pour la détection. Entre ces différents composants, des fentes de taille variable peuvent être ajoutées.
Source
Lampe Xenon
Les fentes
Des fentes peuvent être placées à l'entrée et la sortie des monochormateur.
La largeur des fentes sur le monochromateur d'excitation permettent de déterminer la bande passante de la lumière incidente ainsi que la résolution spectrale.
Par contre les fentes du monochromateur d'émission contrôlent la résolution et l'intensité du signal reçu par le détecteur.
Fentes
Monochromateur d'excitation et d'émission
Les appareils de fluorescence possèdent en général 2 monochromateurs.
Comme en absorption, en fluorescence les molécules sont excitées par une lumière monochromatique. Le monochromateur d'excitation permet donc la sélection précise de la longueur d'onde excitatrice.
Afin de tracer le spectre d'émission de fluorescence, l'intensité de fluorescence est mesurée séquentiellement. Le monochromateur d'émission permet quant à lui une lecture longueur d'onde par longueur d'onde de l'intensité émise.
La sélection de la longueur se fait par déplacement du réseau.
Les fentes
Des fentes peuvent être placées à l'entrée et la sortie des monochormateur.
La largeur des fentes sur le monochromateur d'excitation permettent de déterminer la bande passante de la lumière incidente ainsi que la résolution spectrale.
Par contre les fentes du monochromateur d'émission contrôlent la résolution et l'intensité du signal reçu par le détecteur.
Fentes
Echantillon
Les échantillons sont placés dans des cuves en quartz par exemple.
L'émission de fluorescence a lieu dans toutes les directions. La détection se fait généralement à 90° par rapport à la source afin de ne pas "polluer" le signal avec la lumière excitatrice, permettant ainsi la détection de signaux de faible intensité.
Les fentes
Des fentes peuvent être placées à l'entrée et la sortie des monochormateur.
La largeur des fentes sur le monochromateur d'excitation permettent de déterminer la bande passante de la lumière incidente ainsi que la résolution spectrale.
Par contre les fentes du monochromateur d'émission contrôlent la résolution et l'intensité du signal reçu par le détecteur.
Fentes
Monochromateur d'excitation et d'émission
Les appareils de fluorescence possèdent en général 2 monochromateurs.
Comme en absorption, en fluorescence les molécules sont excitées par une lumière monochromatique. Le monochromateur d'excitation permet donc la sélection précise de la longueur d'onde excitatrice.
Afin de tracer le spectre d'émission de fluorescence, l'intensité de fluorescence est mesurée séquentiellement. Le monochromateur d'émission permet quant à lui une lecture longueur d'onde par longueur d'onde de l'intensité émise.
La sélection de la longueur se fait par déplacement du réseau.
Les fentes
Des fentes peuvent être placées à l'entrée et la sortie des monochormateur.
La largeur des fentes sur le monochromateur d'excitation permettent de déterminer la bande passante de la lumière incidente ainsi que la résolution spectrale.
Par contre les fentes du monochromateur d'émission contrôlent la résolution et l'intensité du signal reçu par le détecteur.
Fentes
Détecteur
