Analyse de contaminant dans des matrices complexes

Contaminant ?

La méthode de choix pour confirmer la présence du contaminant consiste à réaliser une analyse avec un spectromètre de masse comme détecteur. Dans ce cas, on peut :

1. soit obtenir le spectre de masse moyen associé au pic chromatographique (ou le spectre de masse associé à chaque temps de rétention) si la détection est réalisée en mode full scan (i.e. spectre entier) – la comparaison de ce spectre de masse avec celui attendu pour le contaminant (dans les mêmes conditions d’ionisation) permet de confirmer ou non sa présence ;
2. soit suivre certains ions caractéristiques du contaminant : 2 au moins sont nécessaires car le rapport de leurs abondances relatives constitue un critère de confirmation de la molécule (idéalement 3 ions sont préférables lorsque cela est possible).

Si l’accès à un spectromètre de masse n’est pas possible, une alternative consiste à réaliser une seconde analyse avec un détecteur classique (ex : HPLC-FLD) sur une colonne chromatographique contenant une phase stationnaire de polarité très différente de celle utilisée lors de la 1^ère analyse : si de nouveau un pic est observé au temps de rétention du contaminant, alors la présence du contaminant peut être confirmée. L’analyse quantitative permettra ensuite d’évaluer la pureté de ce pic : un pic pur de contaminant conduira à une concentration estimée identique avec les deux colonnes chromatographiques.

Concentration ?

L’information quantitative en chromatographie est l’aire ou la hauteur du pic chromatographique obtenu au temps de rétention attendu pour le contaminant recherché. Pour la relier à la concentration en contaminant dans l’extrait analysé, il est nécessaire d’effectuer un étalonnage (externe, interne, ou éventuellement par ajouts dosés en cas d’effets de matrice). La validité de l’étalonnage devra être vérifiée périodiquement pour assurer une fiabilité des concentrations estimées durant l’analyse.

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